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农业综合化学实验教学中心
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双缩脲法测定蛋白质
 

教师姓名

职称

教学时数

3

授课题目

双缩脲法测定蛋白质

教学对象

生物、资环、生工、制药类等本科生

授课地点

中心408室

教学方式

讲授原理、示范关键操作;学生亲自动手操作;多媒体课件

一、本课的重点、难点:

1.实验的基本原理

2.实验中的基本操作

二、教学目标:

1.掌握显色反应原理、离心原理、比色原理

2.掌握实验一般操作技巧:①离心机一般操作和使用注意事项;②722-型分光光度计原理及使用方法。

3.解释本实验结果:①小麦面粉蛋白质正常含量与你所测定结果吻合程度,偏高或偏低的主要原因;②本实验最容易引起误差的步骤在那一步?问什么?

三、实验主要器材及其试剂:

1.普通高速离心机

2.722分光光度计

3.电子天平,牛角勺

4.振荡器等;

5.化学试剂:双缩脲试剂、0.05mol/LKOH、CCl4

四、主要教学内容:

1.讲述原理和操作步骤(链接实验指导)(20min)

2.示教主要操作步骤

①离心机使用操作程序及其注意事项:将所有控制旋钮回零/归位,接通电源;将装有离心液离心管平衡;对称于转轴中心对面放置;控制转速旋钮慢速启动,每3s左右提高一档,直至要求的转速;计时;转速控制旋钮回零;关闭电源开关。轻轻拿出离心管,将上清液倾入比色杯比色。(3min)

②722分光光度计使用注意事项:预热20min,预热阶段必须打开盖子;比色皿加入比色液至2/3处;手持毛面,不得接触透光面;滤纸擦净透光面;当对照比色皿透光面对准光路,垂直放置;用A旋钮调吸光度100%;盖上盖子;用T旋钮调零;拉动比色槽滑杆使样品比色杯对准光路,读取数据。(3min)

③振荡器使用注意事项:三角瓶置于振荡器上,开机,慢慢加速至40转/min,定时10min。(2min)

④分析:(3min)

3.学生操作,教师指导学生操作全过程(时间2h)

几点要求:教师重点检查指导以下内容

①离心机使用是否正确

②振荡器使用是否正确

③分光光度计使用是否正确

4.离心技术介绍-多媒体课件展示(时间20 min)

①离心原理

②离心机及常用的离心技术展示、讲解

5.讨论(时间10min)

教师提问,学生讨论回答。(成绩记录)

①小麦面粉蛋白质正常含量与你所测定结果吻合程度,偏高或偏低的主要原因

五、思考题与课堂讲义e-mail课后发给同学。

1.影响比色测定的主要因素有哪些?

2.离心的目的是什么?离心机使用注意事项?

3.比色原理及其分光计使用注意事项?

六、预习实验内容

1.血清蛋白电泳

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