一、本课的重点、难点:
1.实验的基本原理
2.实验中的基本操作
二、教学目标:
1.了解朗伯比尔定律在糖工作曲线制作中的应用。
2.掌握3,5二硝基水杨酸比色法绘制标准曲线的原理。
3.注意操作事项:①离心机一般操作和使用注意事项;②722型分光光度计原理及使用方法。
三、实验主要器材:
1.大型仪器设备:恒温水浴;722型分光光度计
2.具筛刻度试管25ml,7个;移液管:0.5ml 1支,1ml 2支,2ml 2支。
四、主要教学内容:
1.讲述原理和操作步骤(链接实验指导)
2.学生主要操作步骤
① 准备。准备干净试管,并编号。
②量取。准确的量取各试剂,形成不同糖浓度的反应体系还原糖的提取。
试剂 |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
麦芽糖(mL) |
0 |
0.2 |
0.4 |
0.6 |
0.8 |
1.0 |
1.2 |
蒸馏水(mL) |
2.0 |
1.8 |
1.6 |
1.4 |
1.2 |
1.0 |
0.8 |
3,5-二硝基水杨酸 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
摇匀后沸水浴5min,冷却至室温,定容至20mL,混匀。
③ 测定。不同浓度的糖反应管进行吸光度值的测定A540nm。
④制作标准曲线。通过测定的吸光度值对应的的糖浓度绘制标准曲线。
3.结果计算:
通过标准曲线计算出糖浓度与吸光度值的方程式。
教师指导实验全过程。
五、思考题
1.3,5二硝基水杨酸比色法是如何制作标准曲线的?
2.如何正确绘制标准曲线? |