一、本课的重点、难点:
1.电泳的基本原理
2.实验中的基本操作:样品来源,点样量控制技巧;图像采集过程;分析软件使用方法与技巧。
二、教学目标:
1.掌握电泳技术分离蛋白质的基本原理
2.学会电泳的一般操作
注意:点样两对于电泳分辨率影响;电泳过程稳压电源控制和恒定;透明前的处理。
3.解释蛋白电泳的结果与分析
三、实验主要器材:
1.电泳仪、电泳槽、染色槽、脱色槽、水平摇床
电泳图谱成像、分析系统;滤纸、刀片等。
2.电泳支持物、吸水纸、加样器等。
3.缓冲液、染液和漂洗液等。
四、主要教学内容:
1.讲述基本要求和实验原理:血清蛋白质基本属性列表(5min)
2.讲述操作步骤(链接实验多媒体教学片)(15min)
3.示教主要操作步骤
注意事项:(板书要点及绘制点样示意图)
①点样:点样量适当,位置合理,方向正确,时间短。(2min)
②电泳:黑线为负极,红线为正极,薄膜点样一端置阴极,样点离开盐桥,薄膜拉平、悬空。(2min)
③染色:薄膜浸入染液,保证5min以上。(2min)
④漂洗:每个表面皿中洗2min,最后用水漂洗10s;烘干后在行透明处理。(2min)
⑤透明:先必须烘干薄膜,薄膜浸入透明液中,时间1~3min,贴到干净玻板上,排气泡。(2min)
4.学生操作,教师指导(-贯穿全操作过程(时间2h)
几点要求:教师重点一一检查指导以下内容
①点样是否标准
②薄膜放置位置是否正确
③电泳电压~90V;电泳时间:40~50min。其间注意电源电压大小变化,若电压较高时及时调整。 ④透明时间的把握是否合适
5.电泳技术介绍-多媒体课件展示(时间20 min)
①聚丙烯酰胺凝胶电泳—整套实验设备及实验过程展示、讲解。
②SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
6.讨论(时间10min)
教师提问,学生讨论回答。(成绩记录)
①影响电泳结果的因素
②操作过程注意事项
五、实验后思考题与课堂讲义e-mail课后发给同学。
⑴电泳基本原理:从阴极到阳极排列血清蛋白质等电点与血清蛋白电泳迁移距离。同时写出相应蛋白质的分子量,根据结果说明,醋酸薄膜电泳分离蛋白质过程中,蛋白质分离的主要决定因素。
六、预习试验内容。
1.双缩脲法测定蛋白质
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