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血清蛋白电泳
 

教师姓名

职称

教学时数

3

授课题目

血清蛋白电泳

教学对象

生物、资环、生工、制药类等本科生

授课地点

中心404室

教学方式

讲授原理;示范关键步骤;学生亲自动手操作;多媒体课件

一、本课的重点、难点:

1.电泳的基本原理

2.实验中的基本操作:样品来源,点样量控制技巧;图像采集过程;分析软件使用方法与技巧。

二、教学目标:

1.掌握电泳技术分离蛋白质的基本原理

2.学会电泳的一般操作

注意:点样两对于电泳分辨率影响;电泳过程稳压电源控制和恒定;透明前的处理。

3.解释蛋白电泳的结果与分析

三、实验主要器材:

点样位置离膜一端2~3cm

1.电泳仪、电泳槽、染色槽、脱色槽、水平摇床

电泳图谱成像、分析系统;滤纸、刀片等。

2.电泳支持物、吸水纸、加样器等。

电泳方向:阴?阳

阴极Q 阳极㊣

3.缓冲液、染液和漂洗液等。

四、主要教学内容:

1.讲述基本要求和实验原理:血清蛋白质基本属性列表(5min)

2.讲述操作步骤(链接实验多媒体教学片)(15min)

3.示教主要操作步骤

注意事项:(板书要点及绘制点样示意图)

①点样:点样量适当,位置合理,方向正确,时间短。(2min)

②电泳:黑线为负极,红线为正极,薄膜点样一端置阴极,样点离开盐桥,薄膜拉平、悬空。(2min)

③染色:薄膜浸入染液,保证5min以上。(2min)

④漂洗:每个表面皿中洗2min,最后用水漂洗10s;烘干后在行透明处理。(2min)

⑤透明:先必须烘干薄膜,薄膜浸入透明液中,时间1~3min,贴到干净玻板上,排气泡。(2min)

4.学生操作,教师指导(-贯穿全操作过程(时间2h)

几点要求:教师重点一一检查指导以下内容

①点样是否标准

②薄膜放置位置是否正确

③电泳电压~90V;电泳时间:40~50min。其间注意电源电压大小变化,若电压较高时及时调整。 ④透明时间的把握是否合适

5.电泳技术介绍-多媒体课件展示(时间20 min)

①聚丙烯酰胺凝胶电泳—整套实验设备及实验过程展示、讲解。

②SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

6.讨论(时间10min)

教师提问,学生讨论回答。(成绩记录)

①影响电泳结果的因素

②操作过程注意事项

五、实验后思考题与课堂讲义e-mail课后发给同学。

⑴电泳基本原理:从阴极到阳极排列血清蛋白质等电点与血清蛋白电泳迁移距离。同时写出相应蛋白质的分子量,根据结果说明,醋酸薄膜电泳分离蛋白质过程中,蛋白质分离的主要决定因素。

六、预习试验内容。

1.双缩脲法测定蛋白质

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