教师姓名

职称

教学时数

3

授课题目

氨基酸纸层析

教学对象

生物、资环、生工、制药类等本科生

授课地点

中心-408室

教学方式

讲授原理；示范关键步骤；学生亲自动手操作；多媒体课件

一、重点、难点：层析

1．实验的基本原理

2．实验中的基本操作：样品来源，点样量控制技巧；图像采集过程；分析软件使用方法与技巧。

3.几个重要层析技术的原理、实验装备和基本操作。

二、教学目标：

1．掌握氨基酸纸层析的基本原理。

2．掌握实验一般操作技巧总目标：提高分离、分析效果及分辨率。

3．解释本实验结果，并能够作分析。

4.掌握层析技术的基本原理和基本实验装备的使用。

三、实验主要器材：

1．层析缸；

2．带微机及打印设备的图像采集与分析仪

3．喷雾器、烘箱、通风设备等。

四、主要教学内容：

1．讲述实验要求、原理和操作步骤（链接实验指导P238）-多媒体课件演示（时间20min）

2．示教主要操作步骤

①点样：先设计点样位置；注意控制点样量：(3min)

直径<0.5cm；切勿污染、损伤层析纸。

②层析：层析时间：35～45min。注意层析纸

勿与层析缸接触，以免污染层析纸。3min

③显色：用喷雾器均匀喷洒0.1%的水合茚三

酮（教师示范），然后85～95⁰C条件下5min

完成显色。2min

④分析：找出斑点中心，作标记，丈量流动相

前沿距离和斑点中心到原点距离，分析计算

R_f值。要求列表。 2min-

3．学生操作，教师指导（-贯穿全操作过程—记录成绩（时间2h）

几点要求：教师重点一一检查指导以下内容

①点样是否标准

②层析滤纸放置标准

③喷茚三酮方法是否正确

④图谱处理与分析是否正确

4.层析技术介绍-多媒体课件展示（时间20 min）

①离子交换层析—整套实验设备展示、讲解。

②凝胶过滤层析

③亲和层析

5.讨论（时间10min）

教师提问，学生讨论回答。（成绩记录）

①本实验哪种氨基酸的R_f值最大?哪个最小？，为什么？

②R_f值与a之间的关系？

五、思考题与课堂讲义e-mail课后发给同学。

1．影响氨基酸迁移速度的内因和外因是什么？

2．何谓上向单相层析和双向层析？双向层析技术与单向层析技术主要区别是什么？

3．纸层析技术适合于哪些生物小分子的分离分析？在使用此项技术分离这些物质时，对于流动相有何要求？

4．你知道该项技术在以往的哪些重要理论发现中使用过？

六、预习实验内容

1.电泳技术在分离生物大分子方面的应用。P164、241

2..细胞破碎与维生素C含量测定。P92、296